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Illumina chip-seq文庫制備試劑盒48樣本
產(chǎn)品名稱:Illumina chip-seq文庫制備試劑盒48樣本產(chǎn)品貨號:IP-202-1012 英文名稱:TruSeq ChIP Library Preparation Kit - Set A產(chǎn)品規(guī)格:48 Rxns
產(chǎn)品簡介:
ChIP-Seq整合了染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)和高通量測序的技術(shù)優(yōu)勢,較ChIP-chip具有更大的開放性和精確性,可實現(xiàn)對任意物種的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白全基因組范圍內(nèi)DNA結(jié)合位點,為全面解析基因調(diào)控提供了新的支撐技術(shù)。ChIP-Seq首先利用抗體特異性地富集蛋白-DNA復合體,然后純化DNA片段,并經(jīng)末端修復、加A和加測序接頭后,再經(jīng)低循環(huán)數(shù)的PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳回收特定大小片段,完成測序文庫制備的工作。構(gòu)建好的文庫經(jīng)cBot擴增,用Illumina GAIIx進行測序,并通過生物信息學分析,鑒定出目的蛋白與基因組DNA結(jié)合的位點。
產(chǎn)品名稱:Illumina chip-seq文庫制備試劑盒48樣本
產(chǎn)品貨號:IP-202-1012
產(chǎn)品特點:
產(chǎn)品優(yōu)勢:
精確性高:基因組結(jié)合位點定位精確性可達±50bp。
可靠性高:比ChIP-Chip具有更低的背景,無交叉雜交非特異性。
檢測動力學范圍廣:定量檢測不同結(jié)合強度轉(zhuǎn)錄因子/組蛋白的結(jié)合特異性。
全面的分析:可在全基因組范圍內(nèi)鑒定結(jié)合位點,無需候選序列信息。
更經(jīng)濟的分析:花費只有全基因組ChIP-Chip的1/30~1/10。
更低的起始樣品量:僅需低至10~50ng的免疫沉淀DNA
技術(shù)參數(shù):
樣本要求:
細胞樣品:單次樣品制備需大于2×107細胞。1%甲醛固定細胞后,PBS清洗細胞3次,離心收集細胞沉淀,液氮速凍,-80℃保存,干冰運輸。
ChIP DNA樣品:樣品量大于50ng,樣品濃度不低于10ng/μl,OD260/OD280為1.8~2.0。DNA片段大小在100~500bp之間,主帶明顯。樣品最好進行過ChIP-PCR驗證。樣品溶于超純水中,放于DNase-free的不黏管中,管口用封口膜封好,干冰運輸。
相關(guān)知識:
Illumina二代測序技術(shù),邊合成邊測序(SBS),是廣泛采用的新一代測序(NGS)技術(shù),負責產(chǎn)生世界上90%以上的測序數(shù)據(jù)。
Illumina的二代測序技術(shù)稱為邊合成邊測序(Sequencing-by-Synthesis,簡稱SBS)。SBS主要包括堿基延伸、熒光激發(fā)及信號收集、剪切等3個步驟。這3個步驟可以重復,循環(huán)進行。每循環(huán)一次測定一個堿基。想測定多少個堿基(即讀長),就循環(huán)多少次。測序循環(huán)次數(shù)可以在軟件里設(shè)定。到底測序多長合適,要根據(jù)項目性質(zhì)和需求來決定。大多數(shù)情況下,SR實驗(單端測序)測定1x50個堿基,PE實驗(雙端測序)測定2x150個堿基。
1 堿基延伸
Illumina測序試劑里所使用的dNTP特色,它們同時具有兩個修飾基團:一個熒光基團,一個可逆終止基團。可逆終止基團技術(shù)是Illumina二代測序的一大特色。它與橋式PCR技術(shù)一起,構(gòu)成了Illumina二代測序的兩大支柱,為穩(wěn)定獲得高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)打下了堅實的基礎(chǔ)。
2 信號采集
HiSeq系列測序儀具有紅綠兩根激光管,兩個濾色片。它們兩兩組合,可以形成4種不同的激發(fā)波長,正好分別用于激發(fā)A、G、C、T 4種堿基。
Cluster上所標記的熒光基團在激光激發(fā)下產(chǎn)生的信號,可以用相機拍攝或者掃描的方式收集信號。掃描技術(shù)速度比較快,被X10系列采用。由于FC面積比較大,而且上表面和下表面要分別拍照,所以拍照過程相當耗時。對于經(jīng)典的HiSeq 2000來說,一次測序循環(huán)所產(chǎn)生的熒光信號,需要大約40分鐘的時間才能拍照收集完畢,時間比測序反應(yīng)本身還要長。
3 剪切
熒光信號收集完畢后,關(guān)閉激光,用剪切劑去除測序引物的延伸產(chǎn)物上的堿基所標記的熒光基團和終止基團。兩個修飾基團均被切除,一方面消去干擾熒光,一方面使鏈末端的堿基回復到自然的可延伸狀態(tài),為下一輪測序做好準備。
再重復合成、激發(fā)、收集等步驟,即可進行第二個堿基的測序。
產(chǎn)品訂購信息
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
Illumina IP-202-1012 TruSeq ChIP文庫制備試劑盒 12 indexes, 48 Rxns
Illumina IP-202-1024 TruSeq ChIP文庫制備試劑盒 12 indexes, 48 Rxns
產(chǎn)品名稱:Illumina chip-seq文庫制備試劑盒48樣本
產(chǎn)品貨號:IP-202-1012
關(guān)于公司:
Illumina的目標是應(yīng)用創(chuàng)新技術(shù)來分析遺傳變異和功能,實現(xiàn)幾年前甚至還無法想象的研究。我們的任務(wù)是提供創(chuàng)新、靈活、可擴展的解決方案以滿足客戶的需求。作為一家重視合作互動、快速交付解決方案和提供高質(zhì)量水平的全球性公司,我們努力應(yīng)對這一挑戰(zhàn)。Illumina創(chuàng)新的測序和芯片技術(shù)正在推動生命科學研究、轉(zhuǎn)化和消費者基因組學以及分子診斷中的進展。
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