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康為世紀(jì) 2×Flash MasterMix含染料PCR預(yù)混
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 2×Flash MasterMix含染料PCR預(yù)混產(chǎn)品貨號:CW3009H英文名稱:2×Flash PCR MasterMix (Dye) 產(chǎn)品規(guī)格:40 ml
產(chǎn)品介紹:
本品是由一款新型高效的快速DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑組成的預(yù)混體系,濃度為2×。本產(chǎn)品為康為世紀(jì)新型快速DNA聚合酶,具有*的擴(kuò)增速度與穩(wěn)定性,延伸速度可達(dá)5 s/kb,最短十五分鐘完成PCR,長片段(大于3 kb)或者復(fù)雜模板可以采用10-30 s/kb的延伸速度或者較多循環(huán)數(shù)。MasterMix配方使整個(gè)反應(yīng)體系非常穩(wěn)定,同時(shí)復(fù)雜模板也能得到有效擴(kuò)增,超過98%的PCR擴(kuò)增能一次成功。使用時(shí)只需要加入DNA模板和引物,補(bǔ)足水即可反應(yīng),可最大限度地減少人為誤差、降低污染和節(jié)約時(shí)間。
本產(chǎn)品已加入染料(藍(lán)色),反應(yīng)結(jié)束后可直接進(jìn)行電泳檢測。擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3′端附有一個(gè)“A"堿基,因此可直接用于T/A克隆,并適用于康為無縫克隆試劑盒(CW3034)、T4連接試劑盒(CW0805)和感受態(tài)產(chǎn)品(CW0812)。
本產(chǎn)品主要適用于超快PCR、復(fù)雜模板、復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)、對高保真性有要求的基因克隆等實(shí)驗(yàn)和大規(guī)?;驒z測。
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 2×Flash MasterMix含染料PCR預(yù)混
產(chǎn)品貨號:CW3009H
質(zhì)量控制:
經(jīng)檢驗(yàn)無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余DNA;能有效地?cái)U(kuò)增多種基因組中的單拷貝基因。
使用說明:
以下舉例為以人基因組DNA為模板,擴(kuò)增1 kb的片段的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。
實(shí)驗(yàn)設(shè)定:
1.模板DNA量設(shè)定:
模板過量可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增或smear。50 μl PCR反應(yīng)體系中模板DNA推薦使
用量如下:
-人基因組DNA 5 ng-500 ng
-大腸桿菌基因組DNA 50 pg-100 ng
-質(zhì)粒DNA 10 pg-1 ng
2.引物濃度設(shè)定:
引物濃度可設(shè)為0.1 μM-1.0 μM之間。引物濃度過低時(shí)可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物少。引物濃度過高會(huì)抑制特異性擴(kuò)增,可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
3.退火溫度設(shè)定:
一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃,無法得到理想的擴(kuò)增效率
時(shí)可適當(dāng)降低退火溫度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)可適當(dāng)提高退火溫度。對于復(fù)雜模
板,需要調(diào)節(jié)退火溫度實(shí)現(xiàn)高效擴(kuò)增。
4.延伸時(shí)間設(shè)定:
延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定。以下為推薦的延伸時(shí)間:
質(zhì)粒等簡單模板:5-15 s/kb;
常規(guī)基因組、cDNA模板:10-15 s/kb;
復(fù)雜模板、粗提模板:20-30 s/kb;
(延伸時(shí)間不宜過短應(yīng)至少在5 s/kb以上,也不宜超過30 s/kb)。
5.循環(huán)數(shù)設(shè)定:
可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果
循環(huán)次數(shù)太多,錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加,非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前
提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。
保存條件:-20℃
產(chǎn)品訂購信息:
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
康為世紀(jì) CW3009H 2×Flash PCR MasterMix(Dye) 40 ml
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 2×Flash MasterMix含染料PCR預(yù)混
產(chǎn)品貨號:CW3009H
關(guān)于公司:
康為世紀(jì)是主要從事高附加值、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),為生命科學(xué)研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù)。康為世紀(jì)建立了專業(yè)化、集約化、能夠形成自主知識產(chǎn)權(quán)的技術(shù)創(chuàng)新體系和開放式的合作創(chuàng)新平臺(tái),構(gòu)建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系。
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