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Peprotech 300-02重組人-干擾素IFN-γ
Peprotech 300-02重組人-干擾素IFN-γPeprotech 重組人-干擾素IFN-γ是由CD4和CD8T淋巴細胞以及活化的NK細胞產(chǎn)生的酸不穩(wěn)定干擾素。IFN-γ受體存在于大多數(shù)免疫細胞中,其通過增加I類MHC蛋白的表面表達來響應(yīng)IFN-γ信號傳導(dǎo)。這促進了抗原呈遞給T輔助細胞(CD4 +)。
Peprotech 300-02重組人-干擾素IFN-γ
Peprotech 300-02重組人IFN-γ
產(chǎn)品規(guī)格:100μG
產(chǎn)品描述:
Peprotech 重組人-干擾素IFN-γ是由CD4和CD8T淋巴細胞以及活化的NK細胞產(chǎn)生的酸不穩(wěn)定干擾素。IFN-γ受體存在于大多數(shù)免疫細胞中,其通過增加I類MHC蛋白的表面表達來響應(yīng)IFN-γ信號傳導(dǎo)。這促進了抗原呈遞給T輔助細胞(CD4 +)。抗原呈遞細胞中的IFN-γ信號傳導(dǎo)和識別抗原的B和T淋巴細胞調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的抗原特異性階段。另外,IFN-γ刺激許多淋巴細胞功能,包括巨噬細胞,NK細胞和嗜中性粒細胞的抗微生物和抗腫瘤反應(yīng)。人IFN-γ是物種特異性的,僅在人和靈長類動物細胞中具有生物活性。重組人IFN-γ是含有144個氨基酸殘基的16.8kDa蛋白質(zhì)。
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PeproTech細胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),并且通常以少量的鹽來進行凍干處理,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,務(wù)必在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象)。
產(chǎn)品來源:大腸桿菌
CIK 培養(yǎng)用細胞因子和抗體:
IFN-γ (干擾素-γ)
IFN-γ 具有上調(diào)外周血淋巴細胞表面IL-2R表達的作用,因此會增強T細胞對IL-2促
增殖反應(yīng)的敏感度和強度。在誘導(dǎo)CIK細胞形成的過程中加入IFN- γ ,可降低IL-2的用量。
研究發(fā)現(xiàn),IFN-γ加入的順序與CIK的細胞毒活性密切相關(guān)。先加入IFN- γ,培養(yǎng)24后再
加入IL-2,可明顯提高CIK的細胞毒活性。
CIK 是“Cytokine-Induced Killer Cells"的縮寫,中文全稱為“細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞"。
CIK 是單個核細胞在CD3 單抗和多種細胞因子(包括IFN-γ, IL-2 等)的作用下培養(yǎng)獲得的一
群以CD3+CD56+細胞為主要效應(yīng)細胞的異質(zhì)細胞群, 其既具有T 淋巴細胞強大的抗腫瘤活
性,又具有NK 細胞(自然殺傷細胞)的非MHC(主要組織相容性抗原)限制性腫瘤殺傷能力。
CIK 細胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣,對正常組織毒性低,體外可高度擴增等特點,是目前
臨床上廣泛使用的過繼性免疫-治療細胞。
Peprotech 300-02重組人-干擾素IFN-γ
AA序列:MQDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKA IHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFQGR RASQ
純度:通過SDS-PAGE凝膠和HPLC分析≥98%。
生物活性:該ED?50通過使用HT-29細胞細胞毒性分析來確定是≤0.05納克/毫升,相當于≥2×10的比活性7單位/ mg。
交叉反應(yīng)性:
細菌,魚+病毒,人類,人類+細菌,人類+倉鼠,人類+小鼠,人類+病毒,Mandarin魚,猴子,小鼠,N / A,豬,兔子,大鼠
可用于研究艾滋病,免疫系統(tǒng) 干細胞和分化
【細胞制備】
1. 外周血單個核細胞的采集
1.1 用血細胞分離機采集患者自身的外周血單個核細胞50-100mL;
1.2 淋巴細胞分離液密度梯度離心法進一步純化單個核細胞(PBMC);
1.3 無血清培養(yǎng)液洗滌2 次,獲得純度在90%以上的PBMC。
2. CIK 細胞的培養(yǎng)及鑒定
2.1 將PBMC 按1-2 x 106/ml 的濃度懸浮于無血清培養(yǎng)液中,加入1,000 U/ml 的重組
人IFN-γ,37oC,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
2.2 24h 后加入50ng/ml 的CD3 單克隆抗體和300 U/ml 的重組人IL-2,刺激CIK 細
胞的生長和增殖;
注:此時也可同時加入100 U/ml 的重組人IL-1α。
2.3 每3 天半量換液或擴瓶一次,并補加重組人IL-2 300 U/ml;
2.4 在培養(yǎng)的第14d,收獲CIK 細胞。
2.5 CIK 細胞質(zhì)控:
2.9.1 臺盼藍染色檢測:活細胞應(yīng)在80%以上;
2.9.2 流式細胞儀檢測細胞表面CD3、CD8、CD56 等分子的表達:CD3+CD56+細
胞的比例應(yīng)在20%以上。
2.9.3 細胞殺傷實驗:以CIK 細胞為效應(yīng)細胞,以腫瘤細胞(可為原代腫瘤細胞或
腫瘤細胞株)為靶細胞,將效應(yīng)細胞與靶細胞按10 : 1(數(shù)目比) 的比例加入
96 孔U 型板中,每孔含靶細胞1 x 104 個,終體積為200 μl,設(shè)3 個復(fù)孔。
培養(yǎng)4h,然后取培養(yǎng)上清,用乳酸脫氫酶(LDH) 試劑盒檢測效應(yīng)細胞對靶
細胞的殺傷率。
2.9.4 收獲細胞前,取少量培養(yǎng)物進行細菌、真菌培養(yǎng),并檢測支原體、衣原體,
及內(nèi)毒素(標準:病原學(xué)檢測陰性,內(nèi)毒素<5 Eu)。
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