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Cellex natural killer cell kit protocol
使用流程:
1, PBMC的分離:
a) 準備一支含20ml Ficoll的離心管,將30ml抗凝血(為肝素抗凝的外周血)直接加入管中,800G,升速1,降速1,離心15min;
b) 離心后,將血漿吸出移入另一個50ml離心管中(約15-20ml),將白膜層吸出移入兩個15ml離心管中,補充PBS,離心800G,9min;
血漿56℃滅活25min,然后離心3000rpm,3min,待用;
c) 離心后,棄上清,用 PBS重懸細胞,將細胞吹勻后離心,400G,9min;洗滌2次;
d) 用10ml NKGM(I/Kit)重懸細胞沉淀,計數(shù)待用。
注:分離PBMC時應注意觀察血小板是否分離干凈,如去不凈可用培養(yǎng)基(NKGM)多洗一次。
2, 刺激活化PBMC步驟
注:整個培養(yǎng)流程中,細胞應處于較為靜止的狀態(tài),除加液和轉移等必須步驟,應避免劇烈吹打和震蕩細胞。
a) day0,用20ml PBS輕柔清洗初始NK細胞培養(yǎng)袋(K/Kit)兩次;按照下列表格定容,然后用50ml注射器注入初始培養(yǎng)袋中;使用注射器,將培養(yǎng)袋中空氣抽凈,防止培養(yǎng)袋中有較大的氣泡存留;培養(yǎng)袋做好標記,放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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Serial
產品名稱
公司/品牌
貨號
描述
規(guī)格
1
natural killer cell culture kit
Cellex
17510500
NK細胞初期培養(yǎng)袋 (K/Kit)
10ml
Cellex
16087585
NK細胞培養(yǎng)基 (I/Kit)
1000ml
Cellex
16087583
NK細胞培養(yǎng)基-培養(yǎng)袋 (T/Kit)
2 x 1000ml
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