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本篇教你間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基該如何制備
更新時(shí)間：2023-05-24 點(diǎn)擊次數(shù)：1311次
間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，可用于許多治療領(lǐng)域。為了研究和應(yīng)用這些細(xì)胞，需要制備一種適合它們生長和增殖的培養(yǎng)基。以下是制備間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的步驟。
1.培養(yǎng)基配方的確定
間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的組成包括基礎(chǔ)培養(yǎng)液和補(bǔ)充物兩部分?；A(chǔ)培養(yǎng)液可以選擇DMEM/F12、MEM或α-MEM等，其中含有必要的營養(yǎng)物質(zhì)和緩沖劑，可以維持MSCs的基本生長需求。補(bǔ)充物可根據(jù)不同研究目的進(jìn)行調(diào)整，常見的有10%胎牛血清(FBS)、5-20 ng/ml的人重組FGF、L-抗壞血酸酸鈉(Vc)、牛血清白蛋白(BSA)等。在補(bǔ)充物選擇上，注意避開對細(xì)胞有毒的成分。
2.消毒操作
將所有耗材(瓶蓋、吸頭、移液管等)在121℃高壓蒸汽下滅菌30min以上，同時(shí)將操作臺面、手套、藥品瓶口用70%乙醇擦拭，避免細(xì)菌污染。
3.基礎(chǔ)培養(yǎng)液的配制
按照培養(yǎng)基配方的要求稱量并加入適量的無菌純水，混合均勻后用0.22um濾器過濾滅菌。
4.補(bǔ)充物的添加
將經(jīng)過消毒和質(zhì)檢的補(bǔ)充物根據(jù)所需比例加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，同時(shí)通過濾器再次過濾消毒。
5.調(diào)節(jié)pH值
用NaOH或HCl等調(diào)節(jié)劑將培養(yǎng)基的pH值調(diào)至7.2-7.4，以確保MSCs在正常生理范圍內(nèi)生長。
6.分裝與保存
將制作好的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基分裝到無菌試管或瓶中，密封好后存放于-20℃冰箱中保存。使用前需要先解凍并加入適當(dāng)?shù)目股胤乐辜?xì)菌污染。
總之，制備間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基需要嚴(yán)格遵守消毒操作和培養(yǎng)基配方的要求，以確保培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定和可靠性。
