腺病毒純化試劑盒的幾種類型:
1.腺病毒純化試劑盒:從1-2個(gè)T75培養(yǎng)皿的感染細(xì)胞培養(yǎng)液中純化腺病毒
2.腺病毒大量純化試劑盒:從6-8個(gè)T75培養(yǎng)皿的感染細(xì)胞培養(yǎng)液中純化腺病毒
3.腺相關(guān)病毒純化試劑盒:從1-2個(gè)T75培養(yǎng)皿的感染細(xì)胞培養(yǎng)液中純化腺相關(guān)病毒
4.腺相關(guān)病毒大量純化試劑盒:從6-8個(gè)T75培養(yǎng)皿的感染細(xì)胞培養(yǎng)液中純化腺相關(guān)病毒
下面介紹一下腺病毒純化試劑盒簡單的層析過程。
沒有超速離心,取而代之的是一種由VIRAPUR推出的特殊的膜,能根據(jù)腺病毒*的表面特征,特異吸附腺病毒顆粒。試劑盒提供的一次性濾器——Adeno-X純化過濾器能適配一次性針管或者真空泵,當(dāng)含有病毒的溶液流經(jīng)濾器,腺病毒顆粒即被濾器中的這種膜截留。截留的病毒顆??梢杂煤苄◇w積的洗脫液洗脫下來。這個(gè)過程,從收細(xì)胞到純化,只需要2—3小時(shí)可以搞定。
這個(gè)純化系統(tǒng)由四個(gè)部件組成:儲(chǔ)液瓶、套管、濾器和真空系統(tǒng)。當(dāng)然,濾器是整個(gè)組合中的關(guān)鍵部分。在標(biāo)準(zhǔn)制備試劑盒中,濾器連接BD Luer-Lok tip syring,以針筒作為另一個(gè)真空系統(tǒng)。Mega試劑盒則提供連接管,以便較大的Mega濾器可以連接真空泵。
真空用于將腺病毒粗提液(即培養(yǎng)基上清和細(xì)胞裂解上清混合)從儲(chǔ)液瓶抽過濾器,經(jīng)過洗滌后濾器和Luer-Lok tip syring相連,用少量洗脫液洗脫病毒顆粒。節(jié)省濃縮過程。
無論是純度還是效價(jià),這個(gè)試劑盒的純化結(jié)果和氯化銫梯度離心的結(jié)果相當(dāng)。病毒顆粒:可感染病毒的比例在25:1—100:1之間。而且這個(gè)方法無需額外訓(xùn)練,簡單易行。標(biāo)準(zhǔn)試劑盒(K1654-1,-2)可以得到1012的病毒顆粒(1—5x1010 ifu)Mega試劑盒的產(chǎn)量是標(biāo)準(zhǔn)的10倍試劑盒提供所有重要的試劑,你只要準(zhǔn)備PBS、DNase和針筒就可以了。你會(huì)發(fā)現(xiàn),純化腺病毒從未如此簡單過。
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